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KJD13L 溶藻弧菌核酸快速檢測試劑盒(恒溫熒光法) 24test

英文名稱:Rapid Detection kit forVibrio alginolyticus

貨 號 :KJD13L

規(guī) 格 :24 測試/盒

用途:用于溶藻弧菌的快速檢測,可借助顯色指示劑直接判讀結果

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商品詳細
說明書
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行業(yè)應用
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產品名稱:溶藻弧菌核酸快速檢測試劑盒
英文名稱:Rapid Detection kit forVibrio alginolyticus

產品編號與包裝規(guī)格:

編號 規(guī)格
KJD13L24 測試/盒

產品簡介:本試劑盒基于環(huán)介導的恒溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),用于溶藻弧菌的快速檢測,可借助顯色指示劑直接判讀結果。

檢測原理:利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶,使模板兩端引物結合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結構,引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應,實現(xiàn)在恒溫條件下(60-65℃)進行連續(xù)快速擴增。反應加入顯色指示劑,陰陽性結果顯色差異顯著,可直接通過顏色變化判讀結果。

產品特點:
      1. 快速簡便:將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理,增加試劑穩(wěn)定性,使用時減少溶液配制步驟,更為便捷,整個檢測反應可在1 h內完成;
      2. 特異性高:利用靶基因序列上的多個獨立區(qū)域設計多條引物,保證擴增反應的高度特異性;
      3. 靈敏度高:最低檢驗限達到10 CFU/Test;
      4. 判讀簡單:反應前加入顯色指示劑,反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果,直觀方便,且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。

溶藻弧菌核酸快速檢測試劑盒產品組分:

組分編號 組分名稱 規(guī)格數量
DRL13檢測試劑(凍干)3排 × 8管
FRL01復溶液650μL × 1管
PRL13陽性對照(凍干)1管
SHR01陰性對照(凍干)1管
SHR02裂解液1mL × 1管
SHR03顯色指示劑80μL× 1管
SHR04超純水1mL× 1管
 說明書1份

儲存條件與保質期:2~8℃條件下儲存,有效期為12個月。

適用儀器:
      1. PCR儀器或金屬浴恒溫器,如果檢測樣品為DNA樣品,水浴鍋即可。
      2. 高速離心機,樣品的前處理需要用高速離心機做分離。

樣品富集:
      1. 樣品前處理:參照《SN_T_2754_12-2011_出口食品中致病菌環(huán)介導恒溫擴增(LAMP)檢測方法_第12部分:溶藻弧菌》或各實驗室自行建立或參考的前處理方法。
      2. 適用樣品類型:增菌液或者可疑菌落樣品。
      3. 待測樣品存放:粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃,存放時間不應該超過24 h;利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存,但應避免反復凍融。

溶藻弧菌核酸快速檢測試劑盒使用指南:

1,樣品前處理

   A. 樣品增菌液模板DNA的制備:
         a) 吸增菌液1 mL到1.5 mL規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min離心5 min,棄上清,50 μL無菌超純水懸浮洗滌沉淀1-2次,6000 r/min離心5 min,完全去除上清;
         b) 加入30 μL裂解液,充分懸浮菌體,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱10 min;
         c) 12000 r/min離心15 min,上清即為粗提的DNA,可轉移至0.2 mL無菌離心管中,在-20℃下可長期保存。

   B. 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟b)、c)操作。

2,陰、陽性對照和干粉試劑復溶

   A. 陰、陽性對照復溶:首次使用時,加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中,待溶解后混勻,-20℃存儲待用。
   B. 干粉試劑復溶:取出凍干粉試劑,按照需求剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數+1管陽性對照+1管陰性對照),每管加入20 μL復溶液,完全溶解后待用。

3,擴增反應
   A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器,設置到65 ℃待用;
   B. 向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL;
   C. 向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL,蓋緊蓋子;
   D. 將所有的反應管置于恒溫儀器中,恒溫65 ℃反應50 min。

4,結果判讀:反應結束后,建議在自然光線充足的環(huán)境條件下,將樣品置于白色背景下觀察結果,陰性對照檢測試劑管呈淡橙色,陽性對照檢測試劑管呈熒光綠,待測樣品反應管以此作為對照進行判讀,若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符,則本次檢測結果無效,應重新檢測或與產品技術支持聯(lián)系。

LAMP檢測操作指南

LAMP使用方法

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