產(chǎn)品名稱:大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒
英文名稱:Rapid Detection kit for Escherichia coli O157:H7
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:
編號 | 規(guī)格 |
KJD09L | 24 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介:本試劑盒基于環(huán)介導(dǎo)的恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP),用于食品中大腸桿菌O157:H7 的快速檢測,可借助顯色指示劑直接判讀結(jié)果。
檢測原理:利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的 Bst DNA 聚合酶,使模板兩端引物結(jié)合處循環(huán)出現(xiàn)環(huán)狀單鏈結(jié)構(gòu),引物順利與模板結(jié)合并進(jìn)行鏈置換擴(kuò)增反應(yīng),實(shí)現(xiàn)在恒溫條件下(60-65℃)進(jìn)行連續(xù)快速擴(kuò)增。反應(yīng)加入顯色指示劑,陰陽性結(jié)果顯色差異顯著,可直接通過顏色變化判讀結(jié)果。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 快速簡便:將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理,增加試劑穩(wěn)定性,使用時減少溶液配制步驟,更為便捷,整個檢測反應(yīng)可在 1 h 內(nèi)完成;
2. 特異性高:利用靶基因序列上的多個獨(dú)立區(qū)域設(shè)計(jì)多條引物,保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性;
3. 靈敏度高:最低檢驗(yàn)限達(dá)到 29 CFU/Test;
4. 判讀簡單:反應(yīng)前加入顯色指示劑,反應(yīng)后通過肉眼觀察反應(yīng)液顏色變化或者經(jīng)熒光監(jiān)測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結(jié)果,直觀方便,且可有效避免反應(yīng)后開蓋造成的氣溶膠污染。
大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒產(chǎn)品組分:
組分編號 | 組分名稱 | 規(guī)格數(shù)量 |
DRL09 | 檢測試劑(凍干) | 3排 × 8管 |
FRL04 | 復(fù)溶液 | 650μL × 1管 |
PRL09 | 陽性對照(凍干) | 1管 |
SHR01 | 陰性對照(凍干) | 1管 |
SHR02 | 裂解液 | 1mL × 1管 |
SHR03 | 顯色指示劑 | 80μL× 1管 |
SHR04 | 超純水 | 1mL× 1管 |
說明書 | 1份 |
儲存條件與保質(zhì)期:2~8℃條件下儲存,有效期為12個月。
適用儀器:
1. PCR儀器或金屬浴恒溫器,如果檢測樣品為DNA樣品,水浴鍋即可。
2. 高速離心機(jī),樣品的前處理需要用高速離心機(jī)做分離。
樣品富集:
1. 樣品前處理:取 25 g 待檢樣品置于 225 mL 改良 EC肉湯中,前增菌 10-12 h,對增菌液中的菌體富集用于LAMP 快速檢測。
2. 適用樣品類型:增菌液或者可疑菌落樣品。
3. 待測樣品存放:粗提的待檢 DNA 樣品保存于-4~0℃,不應(yīng)該超過 24 h;利用試劑盒提取的 DNA 樣品可在-20℃長期保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒使用指南:
1,樣品前處理
A. 樣品增菌液模板DNA的制備:
a) 在檢測食品中大腸桿菌 O157:H7 時,吸增菌液 1 mL到 1.5 mL 規(guī)格的無菌離心管中,6000 r/min 離心5 min,棄上清,用50 μL無菌超純水懸浮洗滌沉淀1-2次,6000 r/min 離心 5 min,完全去除上清;
b) 加入 30 μL 裂解液,充分懸浮菌體,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱 10 min;
c) 12000 r/min 離心 15 min,上清即為粗提的 DNA,可轉(zhuǎn)移至 0.2 mL 無菌離心管中,在-20℃下可長期保存。
B. 可疑菌落模板 DNA 的制備:挑取可疑菌落,懸浮到含 30 μL 裂解液的無菌離心管中,后按照上述步驟 b)、c)操作。
2,陰、陽性對照和干粉試劑復(fù)溶
A. 陰、陽性對照復(fù)溶:首次使用時,加入 80 μL 超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中,待溶解后混勻,-20℃存儲待用。
B. 干粉試劑復(fù)溶:取出凍干粉試劑,按照需求剪取 n 個檢測試劑管(n=待檢測樣品數(shù)+1 管陽性對照+1 管陰性對照),每管加入 20 μL 復(fù)溶液,完全溶解后待用。
3,擴(kuò)增反應(yīng)
A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器,設(shè)置到 64℃待用;
B. 向上述已加入復(fù)溶液的 n 個反應(yīng)管中各加入顯色指示劑 2.5 μL;
C. 向上述已加入復(fù)溶液的 n 個反應(yīng)管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各 2.5 μL,蓋緊蓋子;
D. 將所有的反應(yīng)管置于恒溫儀器中,反應(yīng) 50 min。
4,結(jié)果判讀:反應(yīng)結(jié)束后,建議在自然光線充足的環(huán)境條件下,將樣品置于白色背景下觀察結(jié)果,陰性對照檢測試劑管呈淡橙色,陽性對照檢測試劑管呈熒光綠,待測樣品反應(yīng)管以此作為對照進(jìn)行判讀,若陰陽對照反應(yīng)管任一結(jié)果與上述情況不符,則本次檢測結(jié)果無效,應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。
LAMP檢測操作指南
LAMP使用方法
更多恒溫?zé)晒夥ê怂峥焖贆z測試劑盒 產(chǎn)品列表:
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 用途 |
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