產(chǎn)品名稱：Cas12a Nuclease(2.5μg/μl)
中文名稱：Cas12a 核酸酶
產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：
| 編號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 產(chǎn)品介紹 | 價(jià)格 |
| HKE373-YH01-01A | Cas12a Nuclease(2.5μg/μl) | 50μg/盒(2.5μg/μl) | crispr基因編輯（核酸酶） | 1365 |
產(chǎn)品描述：
CRISPR/Cas 是細(xì)菌和古細(xì)菌在長(zhǎng)期演化過(guò)程中形成的一 種適應(yīng)性免疫防御系統(tǒng)。CRISPR 相關(guān)蛋白 Cas9 已經(jīng)廣泛應(yīng)用 于基因組編輯，相比于 Cas9 蛋白，Cas12a 具有類(lèi)似的基因組編 輯效率，但具有較低的脫靶效率，在基因治療應(yīng)用中具有巨大 的 潛力。
不同于 Cas9 蛋白，Cas12a 不需要 tracrRNA，只需要單個(gè)由 41-44nt 核苷酸組成的 crRNA 引導(dǎo)。這非常有利于基因組編輯，因 為 Cas12a 不僅比 Cas9 小，而且還具有較小的 crRNA 分子（接 近 Cas9 的總 sgRNA 的一半）。與 Cas9 需要富含 G 的 PAM 相 反， Cas12a-crRNA 復(fù)合物通過(guò)識(shí)別富含 T（5'-TTTN-3'）的 PAM 基 序來(lái)切割靶 DNA。Cas12a 執(zhí)行剪切后的 DNA 雙鏈斷裂 引入了 4 或 5 個(gè)核苷酸突出的粘性末端。這促使 Cas12a 可以作 為一種新 型的基因檢測(cè)和成像的工具。
本制品在蛋白兩端分別加了核定位信號(hào)（NLS），當(dāng) Cas12a 以 NLS 序列表達(dá)時(shí)，Cas12a-RNP 復(fù)合體可以在進(jìn)入細(xì)胞后立即 定位到細(xì)胞核。無(wú)需體內(nèi)轉(zhuǎn)錄或翻譯，提高了該方法在質(zhì)粒系 統(tǒng)上的效率。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1) 純蛋白體系，避免 CRISPR 基因敲除時(shí)引入質(zhì)粒或病毒干擾；
2) 可顯著降低脫靶效應(yīng)。
產(chǎn)品用途：
1，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲除；
2，基于蛋白與 sgRNA 轉(zhuǎn)染的非病毒載體 CRISPR 基因敲入；
3，sgRNA 剪切靶點(diǎn) DNA 效率檢測(cè)，降低體內(nèi)篩選成本；
4，體外剪切靶 DNA 的特異位點(diǎn)。
應(yīng)用實(shí)例：圖例）Cas12a Nuclease 做 DNA 片段體外切割活性檢測(cè)：
帶有靶位點(diǎn)的 DNA 片段約為 2000bp，酶切后的片段為 1600bp 和 400bp。
保存溫度：-20℃保存，或-80℃長(zhǎng)期保存。
Cas12a Nuclease(2.5μg/μl) 產(chǎn)品包裝（A包裝）：
| 產(chǎn)品組成 | 體積 |
| Cas12a Nuclease (2.5μg/μl) | 20 μL |
| 10× Cas12a Reaction Buffer | 1ml |
質(zhì)量保證：經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE 膠檢測(cè)僅可見(jiàn)清晰單一的 目的條帶，純度達(dá) 95%；內(nèi)毒素含量< 100EU/mg；qPCR 方法檢測(cè)無(wú)大腸桿菌基因組殘留；無(wú) RNase、核酸內(nèi)、外 切酶污染。
體外切割體系（20μL）：
| dsDNA | 200 ng |
| sgRNA | 200 ng |
| Cas12a Nuclease | 0.5-1.5 μg |
| 10× Cas12a Reaction Buffer | 2 μl |
| RNase Free Water | To 20 μl |
37 ℃保溫 1 h、70℃保溫 10 min
注：在反應(yīng)體系中可添加 RNase Inhibitor 至 1U/μl，防止 dsDNA 不 純 導(dǎo)致 sgRNA 的降解。
相關(guān)產(chǎn)品：
| HKE365 | Cas9 Nuclease |
| HKE366* | Cas9 D10A Nickase |
| HKE367** | Cas9 H840A Nickase |
| HKE368*** | Cas9(D10A,H840A) Nuclease |
| HKE379 | NLS-Cas9-EGFP Nuclease |
| HKE369 | sgRNA In Vitro one-step Transcription Kit |
| HKE370 | sgRNA Screening and Genotype Confirmation Kit |
* 為 Cas9(D10A) Nickase，能在與 sgRNA 靶序列互補(bǔ)的 DNA 鏈上 產(chǎn)生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可減少意外的脫靶基因修飾。
** 為 Cas9(H840A) Nickase，能在 sgRNA 靶序列所在的 DNA 鏈上 產(chǎn) 生切口，從而形成功能性的單鏈斷裂，可減少意外的脫靶基因修飾。
***為 Cas9 D10A,H840A 雙突變失活酶，具有靶 DNA 結(jié)合活性，但 無(wú) 切割活性，可用于陰性對(duì)照等用途。
