微生物檢測凍干質控菌種大腸埃希氏菌O157:H7使用說明
1、 復蘇大腸埃希氏菌O157:H7質控菌種前應準備適于該菌種生長的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設備，所有操作均應在符合生物安全保護及無菌條件下進行。
2、 啟開大腸埃希氏菌O157:H7質控菌種前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在無菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開塑蓋，撕開鋁蓋，打開西林瓶膠塞，加入復蘇液（購買菌株包裝中提供），將大腸埃希氏菌O157:H7凍干菌種（干粉）制成懸浮液，然后用無菌滴管或移液器吸取適量，移至非選擇性固體培養(yǎng)基平板（或液體培養(yǎng)基）上（除特殊情況或特別推薦外），按推薦的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)和傳代保存（詳見附表“凍干菌種的復蘇培養(yǎng)和傳代保存”）。
3、 有個別凍干菌種（如弧菌屬、乳桿菌屬等）復蘇速度較慢，可按2操作后，同時將菌懸液置推薦的培養(yǎng)條件培養(yǎng)過夜，再選用適合大腸埃希氏菌O157:H7生長的選擇性培養(yǎng)基進行分離，操作見4。
4 、培養(yǎng)后觀察菌種的生長情況，并檢查其純度，如發(fā)現(xiàn)純度不能滿足要求時，應選用適合大腸埃希氏菌O157:H7生長的選擇性培養(yǎng)基進行分離，并按推薦的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)，培養(yǎng)后觀察目標菌的菌落特征與生化特征，挑取典型菌落做純培養(yǎng)后再使用。
5、 本品為一次性用品，開啟之后不宜反復使用或保存，暫不使用時，建議4℃保藏。
6、 復蘇后的菌種一般宜傳代（如:斜面?zhèn)鞔?～3次后使用，菌種傳代5次后建議棄置。
7 、大腸埃希氏菌O157:H7質控菌種購買后應在保質期內使用。
注）：購買后如發(fā)現(xiàn)菌種異?；蛭廴镜惹闆r，請在購買之日起1個月內與我們聯(lián)系。
凍干菌種大腸埃希氏菌O157:H7復蘇示意圖：
附表 凍干質控菌種的復蘇培養(yǎng)和傳代保存
稱 | 復蘇液 （包裝中提供） | 復蘇培養(yǎng)基 | 培養(yǎng)條件 | 保存溫度 | 轉接 頻率 | 備注 |
大腸埃希氏菌、沙門氏菌、志賀氏菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 營養(yǎng)瓊脂（022020） | 24h～48h | 2~ | 一個月 |
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阪崎腸桿菌、陰溝腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌 | ||||||
肺炎克雷伯氏菌、粘質沙雷伯氏菌 | ||||||
變形桿菌、弗氏檸檬酸桿菌 | ||||||
小腸結腸炎耶爾森氏菌 | ||||||
葡萄球菌、微球菌、馬紅球菌、芽胞桿菌 | ||||||
假單胞菌、氣單胞菌屬 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 營養(yǎng)瓊脂（022020） | 24h～48h | 一個月 |
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熒光假單胞菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 營養(yǎng)瓊脂（022020） | 25℃-30℃ 24h～48h | 一個月 |
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腸球菌、鏈球菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 血平板（024070） | 24h～48h | 2~ | 半個月 |
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李斯特氏菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 胰蛋白胨大豆酵母浸膏瓊脂 (TSA-YE) (026020) | 24h～48h | 2~ | 一個月 |
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梭菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 皰肉牛肉粒肉湯（027140）或梭菌増菌肉湯（027145）或哥倫比亞血平板（CP0160） | 48h～72h厭氧培養(yǎng) | 2~8℃ 厭氧環(huán)境 | 半個月 | 接種皰肉牛肉粒肉湯后加無菌液體石蠟（029110）高約1cm。 |
霍亂弧菌、擬態(tài)弧菌 | 堿性蛋白胨水 | 堿性瓊脂（025040） | 24h～48h | 一個月 |
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其它弧菌(副溶血性弧菌、創(chuàng)傷弧菌、河流弧菌、溶藻弧菌等) | 3％NaCl堿性蛋白胨水 | 3％NaCl 營養(yǎng)瓊脂 或3％NaCl TSA （025043） | 24h～48h | 一個月 |
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霉菌、念珠菌、酵母菌 | 沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基 | 馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA)(021050) | 2d～5d | 2~ | 兩個月 |
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空腸彎曲菌 | 布氏肉湯 | 血平板（024070） 42± | 42± | 2~ 微需氧 | 一周 |
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雙歧桿菌 | TPY肉湯 | 雙歧桿菌瓊脂（027330） | 48h～72h厭氧培養(yǎng) | 2~ 厭氧環(huán)境 | 一周 |
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其它乳酸菌(乳酸桿菌、乳酸桿菌亞種、嗜熱乳酸鏈球菌) | MRS肉湯或脫脂乳溶液 | 滅菌脫脂乳或 MRS瓊脂（027315） | 24h～48h | 2~ | 一周 |
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嗜血桿菌屬、奈瑟氏菌屬 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | 巧克力平板培養(yǎng)基 (普通)(029032) | 48h～72h 5～10%CO2環(huán)境 | 2~ 5~10%CO2 環(huán)境 | 一周 |
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軍團菌 | 腦心浸液培養(yǎng)基 | BCYE平板 (CP0020) | 4d～7d | 2~ | 一個月 | 轉接時用一次性接種環(huán)，不能使用酒精燈；如使用平板轉接，培養(yǎng)時建議用牛皮紙或報紙包好，避免平板失水變干。 |
