實驗室在使用檢測方法前，均需先進(jìn)行方法驗證或確認(rèn)，新版《實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)則》對此也提出了明確的要求，但在實際工作中很多實驗人員不能完全理解和執(zhí)行，在檢測過程中對標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法都采用同一種方式和操作方法，使得檢測標(biāo)準(zhǔn)存在著很大的不確定性，影響到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。所以大家需明確兩者的區(qū)別、實施步驟與技術(shù)參數(shù)的不同，這期幫大家詳細(xì)梳理一下，希望對大家有所幫助！

一、方法驗證和確認(rèn)的區(qū)別

1. 定義

方法驗證的對象：方法驗證是指標(biāo)準(zhǔn)方法在引入實驗室使用前，驗證實驗室人、機、料、法、環(huán)等方面是否滿足要求的檢測校準(zhǔn)活動。

所謂標(biāo)準(zhǔn)方法，是由相關(guān)專業(yè)機構(gòu)評價確認(rèn)后，向社會公開的技術(shù)規(guī)范文件。方法驗證是指實驗室在進(jìn)行檢測前所需要證實其自身技術(shù)能力是否滿足符合了相關(guān)的規(guī)定要求。

驗證的目的是：證明檢測實驗室有能力依據(jù)所選擇的標(biāo)準(zhǔn)方法開展檢測活動，并能夠得到滿意的檢測結(jié)果，以確保實驗室可以按照方法開展檢測。

方法確認(rèn)的對象：實驗室在使用非標(biāo)準(zhǔn)方法或其它超出、擴(kuò)充修改后的標(biāo)準(zhǔn)方法時，要首先進(jìn)行方法確認(rèn)，確認(rèn)這些方法的目標(biāo)是能夠獲得準(zhǔn)確有效的檢測結(jié)果。

確認(rèn)的目的是：證明非標(biāo)準(zhǔn)方法的合理性、合法性，各質(zhì)量參數(shù)可以滿足特定預(yù)期用途的特定要求，以確保實驗室能夠使用合規(guī)方法進(jìn)行檢測。

2. 新版《實驗室資質(zhì)認(rèn)定評審準(zhǔn)則》中要求

第十二條 （四）檢驗檢測機構(gòu)能正確使用有效的方法開展檢驗檢測活動。檢驗檢測方法包括標(biāo)準(zhǔn)方法和非標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)當(dāng)優(yōu)先使用標(biāo)準(zhǔn)方法。使用標(biāo)準(zhǔn)方法前應(yīng)當(dāng)進(jìn)行驗證；使用非標(biāo)準(zhǔn)方法前，應(yīng)當(dāng)先對方法進(jìn)行確認(rèn)，再驗證。

二、兩者實施的操作步驟 

1. 方法驗證的實施

實驗室在投入使用新的檢測標(biāo)準(zhǔn)時，應(yīng)根據(jù)方法驗證的步驟進(jìn)行：

首先，實驗室相關(guān)人員應(yīng)對投入使用的新檢測標(biāo)準(zhǔn)文件進(jìn)行評估，確保實驗室的人員、設(shè)備、實驗材料和實驗環(huán)境滿足新的檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求；

第二步，評估結(jié)果滿足檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求后，實驗室需要檢測實驗檢測人員完成的標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限和精密度是否達(dá)到新檢測標(biāo)準(zhǔn)的要求，判定實驗室是否具有執(zhí)行該新標(biāo)準(zhǔn)文件的技術(shù)能力；

第三步，在新檢測標(biāo)準(zhǔn)使用過程中，若發(fā)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)路線未發(fā)生改變時，僅僅是標(biāo)準(zhǔn)名稱、年號或者文本格式發(fā)生變化，實驗室可直接向認(rèn)可機構(gòu)申請標(biāo)準(zhǔn)變更，通過技術(shù)評審，投入使用；若新技術(shù)路線與老技術(shù)路線不一致時，需要對實驗室的所有資源進(jìn)行重新審核評定，通過相應(yīng)的實驗數(shù)據(jù)來證實實驗室是否具備執(zhí)行新標(biāo)準(zhǔn)的能力。

2. 方法確認(rèn)的實施

實驗室人員在使用非標(biāo)準(zhǔn)方法或者擴(kuò)充后的方法時，應(yīng)按照如下步驟進(jìn)行方法確認(rèn)：

首先，實驗室人員應(yīng)該進(jìn)行試驗，進(jìn)行不確定度的評估，確保技術(shù)路線和實驗參數(shù)的合理性；

其次，按照所確定的技術(shù)路線和實驗參數(shù)，完成非標(biāo)準(zhǔn)方法所通過的對比試驗與外部實驗室進(jìn)行對比后的科學(xué)性、準(zhǔn)確性和有效性評價；

第三步，依據(jù)相關(guān)技術(shù)規(guī)定，完成非標(biāo)準(zhǔn)方法的文本編寫，并在使用前告知客戶；

第四步，確認(rèn)非標(biāo)準(zhǔn)方法中需完成特異性、抗干擾性、不確定度等評估。

注意：非標(biāo)方法的變更過程中，需要按照上述步驟重新進(jìn)行確認(rèn)工作，對非標(biāo)文本中的變更后的技術(shù)路線及參數(shù)做出相應(yīng)的修正，并通過相關(guān)的技術(shù)審核和告知客戶。

三、方法驗證和確認(rèn)中的技術(shù)參數(shù)

1. 方法驗證的技術(shù)參數(shù)

方法驗證工作可以利用參考標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或者標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行校準(zhǔn)，也可以與其他方法進(jìn)行結(jié)果比對、參加國家能力驗證、與其他實驗室間進(jìn)行比對，同時也可對影響結(jié)果的各類因素進(jìn)行系統(tǒng)性的評審。

技術(shù)參數(shù)如下：

1）方法的校準(zhǔn)曲線：實驗室應(yīng)確定檢測方法校準(zhǔn)曲線的公式以及校準(zhǔn)曲線的范圍，至少做5個點（不包括空白），測試樣品溶液中被測組分濃度必須在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。

2）方法的回收率：在進(jìn)行方法回收率實驗時，對于禁用物質(zhì)，回收率應(yīng)在方法測定低限、2倍方法測定低限和10倍方法測定低限進(jìn)行3水平試驗；對于已制定最高殘留限量（maximum residue limit，MRL）的，回收率應(yīng)在方法測定低限和MRL中選擇一個合適點進(jìn)行3水平實驗；對于未制定MRL的，回收率應(yīng)在方法測定低限和常見限量指標(biāo)中選擇一個合適點進(jìn)行3水平實驗。

3）方法精密度：在進(jìn)行方法精密度驗證實驗時，對于禁用物質(zhì)，精密度實驗應(yīng)在方法測定低限、2倍方法測定低限和10倍方法測定低限3點進(jìn)行；對于已制定MRL的，精密度應(yīng)在方法測定低限、MRL中選一個合適點進(jìn)行實驗；對于未制定MRL的，精密度應(yīng)在方法測定低限、常見限量指標(biāo)中選擇一個合適點進(jìn)行實驗，重復(fù)測定至少6次。

4）準(zhǔn)確度：重復(fù)分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或水平測試樣品，測定含量經(jīng)回收率校正后平均值與真值的偏差范圍。

5）環(huán)境：考察實驗室環(huán)境是否符合試驗需求，以確保排除環(huán)境對證實的影響。

2. 方法確認(rèn)的技術(shù)參數(shù)

1）定性檢驗方法開發(fā)的主要參數(shù)一般包括：方法的原理、適用范圍、檢測限、選擇性等；

2）定量檢驗方法開發(fā)的主要參數(shù)一般包括：方法的原理、適用范圍、檢測限、定量限、選擇性、線性、準(zhǔn)確度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、再現(xiàn)性、不確定度等；

注意：具體參數(shù)條件除與驗證實驗的校準(zhǔn)曲線、回收率、精密度、準(zhǔn)確度相同外，還需要進(jìn)行特異性、耐用性和測量不確定度評估等確認(rèn)。

● 特異性：實驗室在使用非標(biāo)方法時，有必要對使用方法的特異性進(jìn)行分析，若僅基于色譜分析而沒有使用分子光譜測定的方法，則不能用于確證。所以根據(jù)待測物的化學(xué)結(jié)構(gòu)分析，確保滿足方法特異性分析。確認(rèn)方式可采用氣相色譜分析后，再進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析、液相色譜分析后再進(jìn)行液相色譜-質(zhì)譜分析、免疫親和色譜或氣相色譜-質(zhì)譜分析、氣相色譜分析后再用紅外光譜分析、液相色譜分析后再進(jìn)行免疫層析方法分析。

● 耐用性：方法應(yīng)具有對實驗室檢測可變因素的抗干擾能力，當(dāng)測定條件發(fā)生細(xì)小變動時，方法應(yīng)有保證測定結(jié)果不受影響的承受程度；檢測條件應(yīng)盡可能寬泛，以免操作起來太過嚴(yán)苛。

● 測量不確定度：檢測方法應(yīng)分析其不確定度，根據(jù)不確定度大小，可判定測量結(jié)果質(zhì)量的高低，以便于評定方法結(jié)果的可靠性和測量結(jié)果的可比性。

文章來源：“食品微生物檢測”公眾號；
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