KJD03P EAEC多重PCR檢測試劑盒 24test
英文名稱:MultiplexPCR Detection Kit for EAEC
貨 號 :KJD03P
規(guī) 格 :24測試/盒
用途:適用于食品中腸道集聚性大腸埃希氏菌的定性檢測
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產(chǎn)品名稱:EAEC多重PCR檢測試劑盒
英文名稱:MultiplexPCR Detection Kit for EAEC
注:EAEC表示腸道集聚性大腸埃希氏菌(Enteroaggregative Escherichia coli)。
產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格:
編號 | 規(guī)格 |
KJD03P | 24 測試/盒 |
產(chǎn)品簡介:本試劑盒基于PCR技術(shù),并適用于食品中腸道集聚性大腸埃希氏菌的檢測。
EAEC多重PCR檢測試劑盒檢測原理:利用4對特異性引物和PCR反應(yīng)所需其他試劑,如反應(yīng)緩沖液、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等,加入待檢核酸樣品,即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng)。經(jīng)比對擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)條帶組合即可判定所對應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1. 快速簡便:將酶、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理,增加試劑穩(wěn)定性,使用時減少溶液配制步驟,更為便捷,整個檢測反應(yīng)可在3 h內(nèi)完成;
2. 特異性高:由GB 4789.6?2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)致瀉大腸埃希氏菌檢驗(yàn)》提供的目標(biāo)基因引物,保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性;
3. 判讀簡單:擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀察目標(biāo)條帶即可判別,直觀方便。
儲存條件與保質(zhì)期:2~8℃條件下儲存,有效期為12個月。
所需其他材料和適用儀器:
1. PCR儀、高速離心機(jī)、電泳儀、水平電泳槽、紫外儀、移液器、移液槍頭及離心管等;
2. 瓊脂糖、溴化乙錠(EB)或其他核酸染料。
EAEC多重PCR檢測試劑盒產(chǎn)品組分:
編號 | 組分名稱 | 規(guī)格 × 數(shù)量 |
-- | 干粉試劑 EA1 | 8管 × 3排 |
-- | 干粉試劑 EA2 | 8管 × 3排 |
-- | PCR 復(fù)溶液 | 1mL × 1管 |
Y03 | 陽性對照 | 1管(凍干型) |
-- | 陰性對照 | 1管(凍干型) |
-- | 裂解液 | 1mL × 1管 |
-- | 超純水 | 1mL × 1管 |
-- | 6 × Loading buffer | 240μL × 1管 |
說明書 | 1份 |
EAEC多重PCR檢測試劑盒使用指南:
1,樣品前處理
1) 參照GB 4789.6?2016,使用1 μL接種環(huán)刮取營養(yǎng)瓊脂平板或斜面上培養(yǎng)18 h~24h的菌落,懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中,充分懸浮菌體,輕彈管壁消除氣泡,99℃加熱10 min;
2) 12000 r/min離心15 min,上清即為粗提的DNA,可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中,在-20℃下可長期保存。
2,加樣、反應(yīng)
1) 首次使用時,分別加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照管中,充分溶解,-20℃存儲待用;
2) 取出凍干粉試劑EA1和EA2,按照需求分別剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照),每管加入18 μL復(fù)溶液,充分溶解后待用;
3) 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2 μL,緊蓋后置于PCR儀中按設(shè)定的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng);
4) PCR 反應(yīng)程序如下:
3,結(jié)果判讀:反應(yīng)后每管中加入4μL 6×loading buffer,混勻,并取8 μL樣品經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳后在紫外儀下觀察,陰性對照僅有uidA條帶擴(kuò)增,陽性對照中出現(xiàn)目標(biāo)條帶(參照圖1),PCR試驗(yàn)結(jié)果成立。根據(jù)每個樣品對應(yīng)的凍干粉試劑EA1和EA2反應(yīng)產(chǎn)生的目標(biāo)條帶種類,并查找該目標(biāo)條帶組合所對應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別(參照表1),即為檢測結(jié)果。若陰陽性對照管反應(yīng)結(jié)果不符,則本次檢測結(jié)果無效,應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。