大腸菌群、大腸桿菌檢測(cè)時(shí),所用培養(yǎng)基LST、BGLB、EC肉湯等這些需要用小倒管考察產(chǎn)氣的培養(yǎng)基,滅菌后,偶爾會(huì)有小氣泡留在小倒管內(nèi),導(dǎo)致培養(yǎng)基不能使用。重復(fù)滅菌不僅費(fèi)時(shí),更重要的是會(huì)破壞培養(yǎng)基的有效成分。為了避免這類問(wèn)題的發(fā)生,我們做出如下分析:
原因一:高溫高壓滅菌鍋工作壓力不夠,使氣體不能完全排出
高壓鍋在滅菌過(guò)程中產(chǎn)生的最大壓力不夠,不能將小倒管內(nèi)的氣體擠出,導(dǎo)致滅菌后任留有小氣泡。此外,高溫高壓滅菌鍋若是溫度上升緩慢或者達(dá)不到滅菌溫度,也會(huì)出現(xiàn)類似現(xiàn)象。
解決辦法:使用檢查滅菌效果的用品-壓力蒸汽滅菌指示卡,對(duì)高溫高壓滅菌鍋的滅菌情況進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
原因二:試管塞塞得太緊
在滅菌時(shí),試管塞塞得太緊(有些硅膠塞與試管不配套)會(huì)導(dǎo)致試管內(nèi)壓力與滅菌鍋內(nèi)壓力不一致。當(dāng)滅菌鍋升溫升壓時(shí),鍋內(nèi)壓力會(huì)大于試管內(nèi)壓力,試管內(nèi)壓力不夠,不能將小倒管內(nèi)氣體排盡,就留有氣泡;當(dāng)滅菌鍋降溫降壓時(shí),鍋內(nèi)壓力小于管內(nèi)壓力,可能會(huì)使試管塞和培養(yǎng)基崩出,培養(yǎng)基報(bào)廢。
解決辦法:改用塑料帽、不銹鋼管帽,或者與試管相匹配的硅膠塞。
原因三:小倒管口太小
小倒管在加熱加壓后,一方面液體培養(yǎng)基要進(jìn)入小倒管,另一方面小倒管內(nèi)部的空氣要被排出,如果小倒管管口太小,液體不容易進(jìn)去,里面的空氣不容易被排出,就會(huì)導(dǎo)致有小氣泡生成。
解決辦法:改用開(kāi)口比較大的倒管。
以上提供幾種可能形成氣泡的主要原因,還有幾點(diǎn)建議:
1.可以在高壓鍋壓力降下來(lái)后,溫度不太高的時(shí)候?qū)?a href="http://www.xcgcqjm4.cn/">培養(yǎng)基從鍋中拿出,迅速放在冷水中,急冷,注意要使冷水高度超過(guò)試管中液面高度。利用熱脹冷縮的原理,可以使小倒管中氣泡排出。
2.若使用非全自動(dòng)高溫高壓滅菌鍋(此類鍋一般需要在100℃手動(dòng)關(guān)閉放氣閥),則不要在鍋剛達(dá)到100℃時(shí)就關(guān)閉放氣閥,可以讓高壓鍋在100℃時(shí)多排一會(huì)兒熱氣,這樣有助于小倒管中氣體排出。
此外,盡量不要采用將滅菌后的試管顛倒或大角度傾斜的方式,使小倒管內(nèi)氣體排出。此種方法可能會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基通過(guò)試管口或試管塞受到污染,或者導(dǎo)致試管內(nèi)液體流出。