金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在,空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。因此,食品受到污染的機會很多。美國疾病控制中心報告,由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位,僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生難題,在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒,占整個細(xì)菌性食物中毒的33%,加拿大則更多,占到45%,中國金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件也時有發(fā)生。
一、生物學(xué)特性
典型的金黃色葡萄球菌為球型,直徑0.5-1μm左右,顯微鏡下排列成葡萄串狀見圖1,圖2。
大多數(shù)菌株產(chǎn)生類胡蘿卜素,使細(xì)胞團呈現(xiàn)出深橙色到淺黃色,色素的產(chǎn)生取決于生長條件,故稱為金黃色葡萄球菌。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛,大多數(shù)無莢膜,革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基上生長良好,需氧或兼性厭氧,最適生長溫度37℃,最適生長pH 7.4,干燥環(huán)境下可存活數(shù)周。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起,直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性,可在10-15%NaCl肉湯中生長??煞纸馄咸烟?、麥芽糖、乳糖、蔗糖,產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應(yīng)陽性,VP反應(yīng)弱陽性。
二、流行病學(xué)
(1)季節(jié)分布,多見于春夏季;中毒食品種類多,如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外,剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%,所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。一般說,金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品。
(2)食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌,造成食品污染;食品在加工前本身帶菌,或在加工過程中受到了污染,產(chǎn)生了腸毒素,引起食物中毒;熟食制品包裝不嚴(yán),運輸過程受到污染;奶?;蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r,對肉體其他部位的污染。
三、檢測方法
1、樣品制備: 稱取25g樣品至盛有225mL 7.5%氯化鈉肉湯中,固體樣品研磨或置均質(zhì)器中做成1:10的樣品混懸液。若供計數(shù)檢驗,可按十進制遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當(dāng)稀釋。
2、 增菌與分離培養(yǎng): 將上述樣品勻液于36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。金黃色葡萄球菌在7.5%氯化鈉肉湯中呈混濁生長。將上述培養(yǎng)物,分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板,血平板 36℃±1℃培養(yǎng)18h~24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培養(yǎng)24h~48h。 金黃色葡萄球菌在Baird-Parker平板上,菌落直徑為2mm~3mm,顏色呈灰色到黑色,邊緣為淡色,周圍為一混濁帶,在其外層有一透明圈見圖[4]。用接種針接觸菌落有似奶油至樹膠樣的硬度,偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落;但無混濁帶及透明圈。長期保存的冷凍或干燥食品中所分離的菌落比典型菌落所產(chǎn)生的黑色較淡些,外觀可能粗糙并干燥。在血平板上,形成菌落較大,圓形、光滑凸起、濕潤、金黃色(有時為白色),菌落周圍可見完全透明溶血圈見圖[5]。挑取上述菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。
3、 鑒定: (1) 染色鏡檢: 金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌,排列呈葡萄球狀,無芽孢,無莢膜,直徑約為0.5μm~1μm。見圖6
(2) 血漿凝固酶試驗: 取0.5ml兔血漿,放入小試管,再加入BHI培養(yǎng)物0.2mL~0.3mL,振蕩搖勻,置36℃±1℃培養(yǎng),每隔半小時觀察一次,連續(xù)觀察6小時,出現(xiàn)凝固即將小管傾斜或倒置,內(nèi)容物不流動,判為陽性,同時做陰陽對照見圖7。
環(huán)凱提供金黃色葡萄球菌檢驗系列產(chǎn)品,為微生物監(jiān)控保駕護航:
金黃色葡萄球菌檢驗 | ||||
用途 | 產(chǎn)品類型 | 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 |
增菌 | 干粉 | 024010 | 7.5%氯化鈉肉湯 | 250g/瓶 |
顆粒 | 024010P1 | 7.5%氯化鈉肉湯(顆粒型) | 250g/瓶 | |
即用型 | 24010G1 | 7.5%氯化鈉肉湯(管裝成品) | 10mL×10支 | |
即用型 | CP0700 | 7.5%氯化鈉肉湯(袋裝成品) | 225mL×10袋 | |
樣品 處理 | 干粉 | 022117 | 磷酸鹽緩沖液(PBS) | 250g/瓶 |
即用型 | CP0640 | 磷酸鹽緩沖液(袋裝成品) | 225mL×10袋 | |
CP0511A | 磷酸鹽緩沖液(瓶裝成品) | 225mL×6瓶 | ||
CP0630 | 生理鹽水(袋裝成品) | 225ml/袋×10 | ||
樣品稀釋 | 即用型 | CP0310 | 生理鹽水(管裝成品) | 9mL×20支 |
分離 | 干粉基礎(chǔ) | 024040 | Baird-Parker瓊脂基礎(chǔ) | 250g/瓶 |
添加劑 | 029195 | 卵黃亞碲酸鉀增菌液(Baird-Parker瓊脂配套試劑)(小包裝) | 5mL×5支(小包裝) | |
029192 | 卵黃亞碲酸鉀增菌液(Baird-Parker瓊脂配套試劑)(大包裝) | 25mL×6支(大包裝) | ||
即用型 | 024040A | Baird-Parker瓊脂平板 | 90mm×20個/盒 | |
干粉基礎(chǔ) | 024060 | 血瓊脂基礎(chǔ) | 250g/瓶 | |
即用型 | 024070 | 血平板 | 90mm×20個/盒 | |
干粉 | CRM012 | 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基 | 1000mL/瓶 | |
即用型 | CRM012A | 金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基平板 | 90mm×20個/盒 | |
純 培 養(yǎng) | 干粉 | 024053 | 腦心浸出液肉湯(BHI) | 250g/瓶 |
即用型 | 024053A | 腦心浸出液肉湯(BHI)(管裝成品) | 90mm×20個/盒 | |
干粉 | 022020 | 營養(yǎng)瓊脂(NA) | 250g/瓶 | |
顆粒 | 022020P1 | 營養(yǎng)瓊脂(NA)顆粒培養(yǎng)基 | 250g/瓶 | |
即用型 | 024089 | 營養(yǎng)瓊脂平板 | 90mm×20個/盒 | |
鑒定 | 生化管 | 029180 | 凍干血漿 | 10支/盒 |
產(chǎn)毒實驗 | 試劑盒 | 354SET01-96 | 葡萄球菌腸毒素檢測試劑盒 | 12條,8孔/條 |
核酸快速檢測/鑒定 | FZ004BF2 | 金黃色葡萄球菌核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) | 48test | |
質(zhì)控菌種 | 陽性對照 | FSCC223005 | 金黃色葡萄球菌 | |
陰性對照 | FSCC223011 | 表皮葡萄球菌 |